產品詳情
a549-ddp細胞
- 產品名稱：a549-ddp細胞
- 產品型號：a549-ddp
- 產品廠商：乾思中心
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簡單介紹
a549-ddp細胞
a549-ddp細胞
的詳細介紹人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株
(A549-DDP)
細胞介紹
這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。。
細胞特性
1)來源：肺癌
2)形態：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有上等胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，
可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦
使用的培養基后轉移至l〇cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長
狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備：
注意：客戶收到細胞后按照下面的要求操作：培養瓶里面的培養液是不含藥物
的。待細胞長到70-80%的匯合度時，去掉培養液，加入含500ng/mlDDP藥物
的培養液，放入培養箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，
通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時可以一直用含
藥培養液來消化培養細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提髙到800ng/ml，含藥
培養液用于細胞培養都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。
1.準備 1640 培養基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號 21875-091)，90%;北美胎牛血清，
10%，添加 800ng/mlDDP。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱
濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加
入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補
加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將
細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。**天換液并檢
查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培
養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部
分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止
消化。
按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分
鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。
將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄
去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養基后
加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進行凍存。
注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立
即與我們聯系。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內操作，并請注
意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。