產(chǎn)品詳情
cho-dhfr細(xì)胞
- 產(chǎn)品名稱：cho-dhfr細(xì)胞
- 產(chǎn)品型號：cho-dhfr
- 產(chǎn)品廠商：乾思中心
- 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹
cho-dhfr細(xì)胞
cho-dhfr細(xì)胞
的詳細(xì)介紹
倉鼠卵巢細(xì)(CHO/DHFR)
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞為二氫葉酸還原酶缺陷細(xì)胞。在沒有HT (次黃嘌呤-胸腺嘧啶）時細(xì)胞會
死亡。細(xì)胞培液中加氨甲喋呤可以防止對藥物低抗性的回變細(xì)胞的生長。
細(xì)胞特性
1)來源：中國倉鼠
2)形態(tài)：貼壁生長時，呈上皮細(xì)胞樣。
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1)干冰運(yùn)輸，收到后
立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2)存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)
胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12200036);上等胎牛血清，15%，雙抗1%;
用于表達(dá)蛋白時，也可使用懸浮培養(yǎng)基，使細(xì)胞懸浮生長。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱
濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細(xì)胞處理：
1.復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加
入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)
加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?
細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢
查細(xì)胞密度。
2.細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部
分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止
二氫葉酸還原酶缺陷型 中國 倉鼠卵巢細(xì)胞
(CHO/DHFR)
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分
鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者
3.細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細(xì)
胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至*終濃度為
10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存
管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液
氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立
即與我們聯(lián)系。
所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注
意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
瓶中。