國產細胞培養基常見問題及解決方法（一）

1.血清中可能出現的沉淀物是什么？

 基于多年的實驗研究，用于細胞培養的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物：

（1）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現渾濁，并且在 37℃ 培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。

（2）纖維蛋白，它是經常出現的較大的沉淀物，可以達到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。 因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白 的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態，當經過 后的過濾分裝后，就會在瓶中凝結出現纖 維蛋白沉淀。

（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。也是血清中出現沉淀物的常見原因。

2.血清中的沉淀物對細胞培養有什么影響？

（1）細胞生長。我們的試驗以及經驗表明沉淀物不會影響細胞培養，我們的客戶以及其它血 清生產商也證明了這一點。

（2）過濾。如果血清中出現大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產時已經經過 100nm 或者 40nm 的過濾處理，并且經過了嚴格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細胞培養的血清。

（3）污染。磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端，研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將血清放在培養箱中培養幾天，結果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，可能就斷定血清被污染了。建議不要直接將血清放在培養箱中培養觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進行培養以觀察是否有細菌生長。另外，也可以進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認是否有污染。

3.如何避免血清中沉淀物的出現？

 首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。我們已經發現在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應該盡量避免：

（1）熱滅 清；

（2）在 37℃下培養血清；

（3）γ射線照射；

（4）反復凍融；

（5）在室溫下放置時間過長；

（6）長期儲存在 2-8℃；

4.如何去除血清中的沉淀？

 如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養基內一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。